傳代培養(yǎng)法

原理

細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，就必須進行傳代（再培養(yǎng)）。 傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

材料和試劑

1.細胞：貼壁細胞株

2.試劑：0.25％胰酶、1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清）

3.儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等

操作步驟

1.吸除培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。

2.向瓶內(nèi)加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許，以能覆滿瓶底為限。

3.置溫箱中2~5分鐘，當發(fā)現(xiàn)細胞質回縮，細胞間隙增大后，立即終止消化。

4.吸除消化液，向瓶內(nèi)注入Hanks液數(shù)毫升，輕輕轉動培養(yǎng)瓶，把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細胞時，動作要輕，以免把已松動的細胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液單獨消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養(yǎng)液。

5.用吸管吸取營養(yǎng)液輕輕反復吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。

6.計數(shù)板計數(shù)后，把細胞懸液分成等份分裝入數(shù)個培養(yǎng)瓶中，置溫箱中培養(yǎng)。

原理

細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，就必須進行傳代（再培養(yǎng)）。 傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

材料和試劑

1.細胞：貼壁細胞株

2.試劑：0.25％胰酶、1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清）

3.儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等

操作步驟

1.吸除培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。

2.向瓶內(nèi)加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許，以能覆滿瓶底為限。

3.置溫箱中2~5分鐘，當發(fā)現(xiàn)細胞質回縮，細胞間隙增大后，立即終止消化。

4.吸除消化液，向瓶內(nèi)注入Hanks液數(shù)毫升，輕輕轉動培養(yǎng)瓶，把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細胞時，動作要輕，以免把已松動的細胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液單獨消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養(yǎng)液。

5.用吸管吸取營養(yǎng)液輕輕反復吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。

6.計數(shù)板計數(shù)后，把細胞懸液分成等份分裝入數(shù)個培養(yǎng)瓶中，置溫箱中培養(yǎng)。